Në sintezën tipike të ADN-së, ARN-së dhe acideve nukleike jo-natyrore, hapi i Dembrojtjes dhe Bashkimit luan një rol vendimtar.
Hapi i Dembrojtjes është heqja e grupit DMT në suportin e ngurtë ose grupi hidroksil 5' në nukleozidin e mëparshëm me acid organik dhe ekspozimi i grupit hidroksil për hapin vijues të bashkimit.Acidi trikloroacetik 3% në diklormetan ose toluen përdoret kryesisht për të kryer hapin e dembrojtjes.Përqendrimi i acidit trikloroacetik dhe koha e dembrojtjes (koha e çbllokimit) dominojnë pastërtinë e produkteve përfundimtare.Përqendrimi i ulët dhe koha e pamjaftueshme e çbllokimit lë grupin DMT pa reaguar, që ulin rendimentin dhe rrisin papastërtitë e padëshiruara.Koha e gjatë e çbllokimit mund të çojë në depurinë të sekuencave të sintetizuara, duke formuar papastërti të papritura.
Hapi i bashkimit është i ndjeshëm ndaj përmbajtjes së ujit të tretësve dhe lagështisë në ajër.Përqendrimi i ujit në sintezë duhet të jetë më pak se 40 ppm, më mirë më pak se 25 ppm.Për të mbajtur gjendjen e sintezës anhidër, sinteza e acideve nukleike duhet të kryhet në një mjedis me lagështi të ulët, kështu që ne rekomandojmë klientin tonë të përdorëAmiditet Pajisje të tretura, i cili mund të shpërndajë fosforamiditin pluhur ose vajor në acetonitril anhidrik për të shmangur kontaktin me ajrin.
Meqenëse shpërbërja e fosforamiditeve është më mirë në situatën jo-ujore dhe kurthe molekulare për të përthithur gjurmët e ujit në reagentë dhe amidit, është e nevojshme të përgatitetKurthe molekulare.Ne rekomandojmë 2 g subsieve për shishet e reagentëve 50-250 ml, 5 g për shishet e reagentëve 250-500 ml, 10 g për shishet e reagentëve 500-1000 ml dhe 20 g për shishet e reagentëve 1000-2000 ml.
Tretja e fosforamiditeve duhet të bëhet në atmosferë inerte dhe zëvendësimi i reagentëve aktivizues dhe acetonitrilit duhet të përfundojë në kohë.Reagentët e mbulimit dhe oksidimit duhet të përdoren sa më shpejt që të jetë e mundur, reagentët e hapur japin më pak jetëgjatësi dhe më pak aktivitet gjatë sintezës.
Koha e postimit: Gusht-09-2022