Sinteza e acidit nukleik kryhet duke përdorur metodën e triglicerideve të amidit sialik të fazës së ngurtë, ku fundi 3' i ADN-së imobilizohet në një substrat të fazës së ngurtë dhe nukleotidet shtohen në drejtimin 3' deri në 5' derisa të sintetizohet fragmenti i dëshiruar i ADN-së. .Kjo ndryshon nga sinteza e ADN-së nga aplikimi i ADN polimerazës.
Fundi 3' i bazës së parë është imobilizuar në CPG gjatë sintezës, 5'-OH i bazës tjetër mbrohet me di-p-tolil tritil DMT, grupi amino në bazë mbrohet me acid benzoik dhe 3' -OH më pas aktivizohet me një përbërje aminofosfate.1 bazë e 5 5'-OH e 1 bazë dhe 3'-OH e bazës tjetër formojnë një triglicerid fosfit, i cili më pas oksidohet me jod në një triglicerid fosfat, mbrojtësi në bazën e dytë 5'-OH hiqet nga shtimi i acidit dikloroacetik DM cikle përmes shtimit të bazës tjetër, dhe pas sintezës, mbrojtja në 5'-OH hiqet me një acid të dobët. Fragmenti shkëputet nga rrëshira e ngurtë me hidroksid amoniumi të koncentruar, mbrojtësi hiqet nga baza. me hidroksid të përqendruar të amonit nën ngrohje, hidroksidi i amonit hiqet, fragmenti thahet me vakum dhe acidi nukleik pastrohet me kromatografi të lëngët ose PAGE.
Hapat e sintezës së oligos
Debllokimi
TëGrupi mbrojtës i fundit DMT 5 hiqet duke shtuar zgjidhje TCA.
Aktivizimi
Përzierja e aktivizuesit me monomerin oligonukleotid për të formuar ndërmjetësin aktiv të monomerit oligonukleotid.
bashkim
Grupi hidroksil 5-terminal reagon me ndërmjetësin aktiv oligonukleotid në një reaksion kondensimi anti-gjenerues për të formuar një lidhje të paqëndrueshme trigliceride fosfite.
Mbulimi
Shtimi i një agjenti mbulues kryen një reaksion mbulues acetilimi me grupe të tepërta hidroksil që nuk përfshihen në reaksionin e kondensimit.
Oksidimi
Shtimi i tretësirës së jodit që përmban ujë reagon me lidhje të paqëndrueshme fosfite me anë të oksidimit për të formuar lidhje të qëndrueshme trigliceridike të acidit fosforik.
Shkëputje cianoetilik
Produkti i acidit nukleik pas sintezës, me shtimin e tretësirës DEA për të hequr grupin cianoetil nga lidhja e triglicerideve fosfat.
Cleaved&Dembrojtje
Fragmentet e acidit nukleik shkëputen nga bartësi i fazës së ngurtë duke shtuar një zgjidhje të koncentruar të hidroksidit të amonit dhe më pas nxehen për të hequr grupet mbrojtëse nga lidhjet hidrogjenore të bazave.
Koha e postimit: Nëntor-21-2022